1．2 熒光物質(zhì)8-氨基-1。3，6三磺酸芘(8-amlno-1。3。6-trisulphonic acid，ANTS) 硫酸化多糖用ANTS進(jìn)行標(biāo)記，方法是：將0．15 mol·L 的ANTS溶于30％ 的中，加入多糖在45't2下反應(yīng)15 min后，加入氰基硼，在40℃下反應(yīng)25 h，反應(yīng)結(jié)束后加水稀釋?zhuān)芤和肝龊筮M(jìn)行凍干保存。J。Josef Chmel等人也用ANTS標(biāo)記過(guò)右旋糖酐.

1．3 熒光物質(zhì)N-甲基靛紅酸酐(N—methylisatoic anhydride，M ) MIA標(biāo)記多糖是一種快捷，溫和，便利的方法，成功用于右旋糖酐和氨基半乳糖的標(biāo)記，標(biāo)記方法是：多糖(5—100 g·L )溶解在0．1 mol·L 的鹽溶液中，pH 8，加入50％的二甲基亞砜(DMSO)，10～20 g·L 的MIA溶解在DMSO中，混勻，室溫放置5～10 min后，加入上述溶液中。反應(yīng)迅速，可以?xún)?chǔ)存在一80％中72 h，DMSO的作用是防止DM—SO在水中不溶 J。

1．4 熒光物質(zhì)5-氨基熒光素(fluoresceinamine，F(xiàn)LA) 一些易溶于水的多糖如果聚糖稱(chēng)取40 mg的量溶于2．0 mL蒸餾水中，再加入30 mg溶于350 蒸餾水的使之激活。還有一些糖如芽霉菌糖，昆布多糖，硫酸軟骨素，海藻酸均需溶解在水溶液中，超聲處理5 min，膜過(guò)濾后通過(guò)溶于鹽緩沖液的SephdexG一50，將FLA加入到收集樣品中。二次標(biāo)記可增加標(biāo)記效率 。

1．5 熒光物質(zhì)異硫氰酸熒光素(FITC)FITC標(biāo)記脂多糖的方法：將4 mg脂多糖加入2 mL的0．5％溶液中0℃攪拌20 min，使脂多糖雙鏈解離為單鏈結(jié)構(gòu)。用10 的1mol·L 鹽酸將其PH值調(diào)節(jié)為5，然后加入含5 mg的FITC的0．1 mol·L 磷酸鈉溶液1．5 mL(pH9．5)，并在37~C下攪拌孵育3 h后，在4℃下將其混合物與磷酸鈉溶液徹底分離、離心后，去上清即得FITC．脂多糖 ?。FITC與殼聚糖連接的制備方法：在10．0 mL含1％ 殼聚糖的0．1 mol·L 乙酸溶液中，加入10．0 mL甲醇，再緩慢加入一定體積的2．0 g·L 的FITC甲醇溶液。室溫暗處反應(yīng)3 h后，用0．2 mol·L 沉淀標(biāo)記產(chǎn)物” 。

從褐藻中提取出來(lái)的海洋硫酸多糖911，由于其末端不含氨基，F(xiàn)ITC標(biāo)記多糖的化學(xué)合成反應(yīng)分兩步：第一步：911一Tyr的合成，將400 mg 911溶于15 mL 0．2 mol·L 的磷酸鉀

緩沖液(pH 8．0)，然后依次加人400 mg酪胺和150 mg，于37℃下反應(yīng)96 h，間或振蕩。反應(yīng)完畢，離心分離，將其上清液上Sephadex G-25柱，用水洗脫收集，280 llm

檢測(cè)，收集第一峰，凍干得911一Tyr。第二步：911一Tyr—F ITC合成，取200 mg 911一Tyr溶于水，用0．5 mol·L～NaHCO3調(diào)pH至8．5，然后加入25 mg F ITC，于室溫、避光下反應(yīng)過(guò)夜，再向反應(yīng)物中加入無(wú)水乙醇至乙醇終濃度為80％ ，有大量亮黃綠色沉淀析出，離心棄去上清液。沉淀加水復(fù)溶，乙醇再沉淀，條件同上，重復(fù)3次，得911一Try—F ITC，并進(jìn)一步上Sepha—dex G-25柱純化，收集相應(yīng)水洗脫組分凍干保存 。

1．6 熒光物質(zhì)2·氨基吡啶(Aminopyridine，2-AP) 2-AP溶于760 ILL的12 mol·L 鹽酸中，52．9 mg氰基硼溶于100 的水中。直鏈淀粉溶于90％ 的DMSO中，用1．8倍的水稀釋。首先將100 I 的直鏈淀粉溶液加至1O0ILL的2一AP溶液，60℃反應(yīng)1 h，再加入100 IxL的氰，進(jìn)一步反應(yīng)24 h，反應(yīng)過(guò)后用水稀釋?zhuān)尤?00 的1一丁醇和3 L2mol·I 氯化鈉，混合物在4℃冰箱中放置1 h后直鏈淀粉沉淀析出 。

1．7 熒光物質(zhì)氟硼熒(4，4-difluoro-5，7-dimethyl-4一bora-3a，4adiaza—S—indacene一3一propionicacid，BODIPY)BODIPY通過(guò)還原末端對(duì)聚二糖進(jìn)行標(biāo)記。二糖進(jìn)行低壓凍干，凍干后溶于含BODIPY的甲醇溶液中。將樣品再次低壓凍干后重新溶解在DMSO中，加入5 iLL乙酸，離心后，室溫反應(yīng)4 h，再加入5 的1 mol·L還原30 rain后進(jìn)行低壓凍干，標(biāo)記過(guò)后的樣品溶解在8 50％ 的DMSO中” 。