聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺(acrylamide，簡(jiǎn)稱Acr)和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，簡(jiǎn)稱Bis)在加速劑N，N，N￠，N￠—四甲基乙二胺(N，N，N￠，N￠—tetramethyl ethylenedia mine，簡(jiǎn)稱TEMED)和催化劑過(guò)硫酸銨(ammonium persulfate (NH4)2S2O8。
 
SDS PADE凝膠電泳原理
聚丙烯酰胺凝膠凝膠是由丙烯酰胺(簡(jiǎn)稱Acr)和交聯(lián)劑N，N’一亞甲基雙丙烯酰胺(簡(jiǎn)稱Bis)在催化劑過(guò)硫酸銨(AP)，N，N，N’，N’ 四甲基乙二胺(TEMED)作用下，聚合交聯(lián)向成的具有網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)的凝膠，并以此為支持物進(jìn)行電泳。
聚丙烯酰胺凝膠電泳可根據(jù)不同蛋白質(zhì)分子所帶電荷的差異及分子大小的不同所產(chǎn)生的不同遷移率將蛋白質(zhì)分離成若干條區(qū)帶，如果分離純化的樣品中只含有同一種蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)樣品電泳后，就應(yīng)只分離出一條區(qū)帶。SDS是一種陰離子表面活性劑能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此，各種蛋白質(zhì) SDS復(fù)合物在電泳時(shí)的遷移率，不再受原有電荷和分子形狀的影響，只是分子量的函數(shù)。這種電泳方法稱為SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(簡(jiǎn)稱SDS PAGE)。
 
由于SDS PAGE可設(shè)法將電泳時(shí)蛋白質(zhì)電荷差異這一因素除去或減小到可以忽略不計(jì)的程度，因此常用來(lái)鑒定蛋白質(zhì)分離樣品的純化程度，如果被鑒定的蛋白質(zhì)樣品很純，只含有一種具三級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)或含有相同分子量亞基的具四級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，那么 SDS PAGE后，就只出現(xiàn)一條蛋白質(zhì)區(qū)帶。SDS PAGE可分為圓盤(pán)狀和垂直板狀、連續(xù)系統(tǒng)和不連續(xù)系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)采用垂直板狀不連續(xù)系統(tǒng)。所謂“不連續(xù)”是指電泳體系由兩種或兩種以上的緩沖液、pH和凝膠孔徑等所組成。
 
SDS PADE凝膠配制
SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳是最常用的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方法，特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測(cè)和測(cè)定蛋白質(zhì)分子量。
 
制備凝膠時(shí)首先要根據(jù)待分離樣品的情況選擇適當(dāng)?shù)姆蛛x膠濃度，例如通常使用的15％的聚丙烯酰胺凝膠的分離范圍是104～105，即分子量小于104的蛋白質(zhì)可以不受孔徑的阻礙而通過(guò)凝膠，而分子量大于105的蛋白質(zhì)則難以通過(guò)凝膠孔徑，這兩種情況的蛋白質(zhì)都不能得到分離。所以如果要分離較大的蛋白質(zhì)，需要使用低濃度如10％或7.5%的凝膠(孔徑較大)；而對(duì)于分離較小的蛋白質(zhì)，使用的較高濃度凝膠(孔徑較小)可以得到更好的分離效果。分離膠聚合后，通常在上面加上一層濃縮膠(約1cm)，并在濃縮膠上插入樣品梳，形成上樣凹槽。濃縮膠是低濃度的聚丙烯酰胺凝膠，由于濃縮膠具有較大的孔徑(丙烯酰胺濃度通常為3～5％)，各種蛋白質(zhì)都可以不受凝膠孔徑阻礙而自由通過(guò)。濃縮膠通常pH 值較低(通常pH = 6.8)，用于樣品進(jìn)入分離膠前將樣品濃縮成很窄的區(qū)帶。濃縮膠聚合后取出樣品梳，上樣后即可通電開(kāi)始電泳。
 
SDS PADE凝膠電泳經(jīng)常應(yīng)用于提純過(guò)程中純度的檢測(cè)，純化的蛋白質(zhì)通常在SDS電泳上應(yīng)只有一條帶，但如果蛋白質(zhì)是由不同的亞基組成的，它在電泳中可能會(huì)形成分別對(duì)應(yīng)于各個(gè)亞基的幾條帶。SDS PADE凝膠電泳具有較高的靈敏度，一般只需要不到微克量級(jí)的蛋白質(zhì)，而且通過(guò)電泳還可以同時(shí)得到關(guān)于分子量的情況，這些信息對(duì)于了解未知蛋白及設(shè)計(jì)提純過(guò)程都是非常重要的。

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